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2021-11-25 瀏覽次數：1821

很多人覺得細胞凍存很簡單，但是有些注意事項操作不好會影響或是損壞細胞的質量哦，今天就來給大家總結下，凍存細胞的相關注意事項。

注意事項:

1.欲冷凍保存之細胞應在生長良好(logphase)且存活率高之狀態，約為80~90%致密度。冷凍檢則細胞是否仍保有其*性質，例如hybridoma應在冷凍保存至二日測試是否有抗體之產生。

2.細胞在液氮中可長期凍存無*，而不會影響細胞活力;在-70度可保存數月。

3.注意冷凍保護劑之品質。DISO應為試劑等，無菌且無色以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產品，如Sigma D-2650)，以5~ 10mI小體積分裝，4C避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應為試劑等，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。

在開啟后年內使用，因長期儲存后對細胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時釋放的熱里對細胞的損傷。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應高參，可降低細胞受損。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化，可換用10%甘油凍存。

4.冷凍保存Z細胞濃度:

①normal human fibroblast : 1~ 3x 10'ce1ls/ml

②hybridoma: 1~3x 10*cells/m1,細胞濃度不要太高，某些hybridoma會因冷凍濃度太高而在解凍24小時后si去。

③adherent tumor lines:5~ 7x10，依細胞種類而異。Adenocarcinoma解凍后須較高之濃度，而HeLa只需1~3x 10'cells/ml

④other suspensions:5~ 10X 10'cells/ml，human lymphocyte 須至少5X 10'cells/ml。

5.凍存可用10%~90%的血清，般高濃度血清有助于維護細胞活力，此處介紹20%終濃度有利于細胞懸浮而少沉積(4 度時)，復蘇存活率在80%~90%以上，對原代培養細胞，以90%血清凍存更為有效。